CRISPR/Cas9을 이용한 체세포 돌연변이 유도 및 유전체 변이 추적 분석법

본 문서는 유전자 편집 기술인 CRISPR/Cas9을 활용하여 실험적으로 특정 유전자에 돌연변이를 유도하고, 이러한 유전체 변이를 첨단 분석 기법으로 추적하는 방법론적 측면에 초점을 맞춥니다.

돌연변이 유도 및 검증 전략

• 표적화된 삽입/결실 (Indels) 분석: Cas9의 표적 부위에서 발생하는 Double-Strand Break (DSB) 이후, 주로 Non-Homologous End Joining (NHEJ) 경로를 통해 작은 삽입 또는 결실이 발생하며, 이는 Sanger 시퀀싱 또는 NGS를 통해 확인됩니다.
• 정량적 돌연변이 검출: 유도된 돌연변이의 빈도를 측정하기 위해 TIDE와 같은 소프트웨어를 사용하여 프레임쉬프트 돌연변이율을 계산하거나, 디지털 PCR을 이용하여 특정 변이체만을 정량적으로 증폭시켜 분석할 수 있습니다.